BIO-RAD CFX Maestro是一个化繁为简的BIO-RAD定量PCR数据处理大师,软件能够操作所有CFX系列实时定量PCR仪,进行实验设置、仪器操作和数据分析,软件全面整合了数据采集、统计学分析(t- 检验、方差分析)和用于出版发表的结果导出功能,为实时定量 PCR 仪实验提供了一站式的解决方案。
背景简介:
肌萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS),俗称“渐冻人”,是一种运动神经元疾病,病人表现出因上运动神经元和下运动神经元变性所致的肌无力、肌萎缩等症状。为研究其是否存在细胞自噬的病理,研究者将ALS患者和其他非ALS类型包括包涵体肌炎(inclusion body myositis,IBM,一种慢性炎症性肌病)样本等进行比较。观察ALS病理的一种已知标志物磷酸化TAR DNA结合蛋白43(pTDP-43)以及调节细胞自噬的P62蛋白的特异性表达情况。除用到免疫组化、免疫荧光的方法外,研究人员也对这两种蛋白对应的基因TARDBP 和SQSTM1 进行了qPCR实验分析比较,以下是具体的过程。
样本设置:
ALS样本组——ALS1-ALS5共5个生物学重复;
IBM样本组——IBM1-IBM3共3个生物学重复;
阴性对照组——MSC1-MSC3共3个轻微神经源性肌萎缩样本生物学重复;
空白对照——1个无模板对照
基因设置:
2个目的基因——TARDBP,SQSTM1;
2个参考基因——GAPDH,RPS18;
所用到的染料法引物对均来自于Bio-Rad提供的PrimePCR Assay。
板面布局:
12个样本×4个基因,1个96孔板做2个重复,共做2个96孔板(即2个批次实验,各4个技术学重复)。
数据分析方法:
将TARDBP 和SQSTM1 表达用两个参考基因(GAPDH,RPS18)进行均一化,两组患者分别与对照组进行相对均一化基因表达比较,显著性检验采用非配对t 检验。
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